NanoDrop Eight 是 Thermo Fisher Scientific 推出的高通量微量分光光度計,專為核酸、蛋白質及多種生物分子樣品的快速檢測而設計。其最大的特點是:無需比色皿、僅需 1–2 μL 樣品體積、支持 8 通道同步檢測。這大大提升了實驗室在分子生物學、基因組學和蛋白質組學研究中的檢測效率。
在日常使用中,NanoDrop Eight 可完成濃度測定、純度評估、光譜掃描、標準曲線構建及動力學分析等多種任務,為科研和臨床檢測提供了便捷而精準的解決方案。
NanoDrop Eight 的檢測原理基于光吸收光譜學,其核心為比爾-朗伯定律:
A=ε?c?lA = \varepsilon \cdot c \cdot lA=ε?c?l
其中:
A:吸光度(Absorbance)
ε:摩爾吸光系數
c:溶液濃度
l:光程長度
儀器通過在紫外-可見區(190–850 nm)內發射光,測定樣品吸收光強度,結合已知參數計算樣品濃度與純度。與傳統分光光度計不同,NanoDrop Eight 具備 自動光程調節 功能,可在 0.5 mm 與 1.0 mm 光程間切換,從而保證高濃度樣品仍能在線性范圍內檢測。
打開電源,預熱光源。
運行控制軟件,完成系統自檢與初始化。
根據實驗需求選擇檢測模式(核酸、蛋白、標準曲線或動力學)。
確保樣品澄清透明,避免懸浮物與氣泡。
使用合適緩沖液配置,保證空白對照與樣品一致。
樣品濃度過高時,應先進行稀釋。
在檢測前,先加載空白溶液(緩沖液/溶劑)。
儀器自動扣除背景吸收,校正基線。
使用微量移液器加 1–2 μL 樣品于光學基座。
關閉檢測臂,確保液滴完整覆蓋測量區。
點擊“開始檢測”,幾秒內完成光譜掃描。
系統自動顯示濃度、純度比值及光譜曲線。
結果可保存至本地或上傳至 LIMS 系統。
支持導出 Excel、PDF 等格式,便于歸檔與分析。
DNA:雙鏈 DNA(dsDNA)、單鏈 DNA(ssDNA)、寡核苷酸。
RNA:總 RNA、mRNA、小 RNA。
檢測指標:A260 濃度計算、A260/A280 純度比值(蛋白污染)、A260/A230 比值(鹽/有機物污染)。
直接法:280 nm 吸收峰檢測,適合含芳香族氨基酸的蛋白。
比色法:Bradford(595 nm)、BCA(562 nm)、Lowry 法等。
檢測指標:蛋白濃度、反應顯色強度、標準曲線擬合。
藥物分子、有機化合物、代謝物等。
通過特定波長吸收或顯色反應實現檢測。
水體污染物、有機添加劑、營養成分等。
通過光譜掃描快速定量。
核酸檢測模式
260 nm 定量核酸,自動換算濃度。
輸出 A260/A280 與 A260/A230 比值,判斷樣品純度。
蛋白質檢測模式
280 nm 紫外吸收法或比色法檢測。
軟件可直接調用標準曲線進行定量。
標準曲線模式
用一系列已知濃度標準品繪制曲線。
未知樣品的吸光度值代入曲線方程,自動計算濃度。
動力學模式
固定波長下實時監測吸光度變化。
適用于酶學反應、藥物降解與生化動力學研究。
光譜掃描模式
在 190–850 nm 范圍內繪制完整光譜曲線。
分析樣品的特征吸收峰與分子結構信息。
樣品類型:DNA/RNA 提取產物。
檢測目的:定量與純度分析。
意義:確保樣品質量符合測序、PCR 等實驗要求。
樣品類型:細胞裂解液、純化蛋白。
檢測方式:A280 或 Bradford 法。
應用:電泳、質譜前的蛋白濃度檢測。
樣品類型:小分子藥物溶液。
檢測方式:標準曲線定量。
應用:藥物穩定性、溶解度及釋放度研究。
樣品類型:水體污染物、食品添加劑。
檢測方式:比色顯色法結合標準曲線。
應用:快速檢測污染物濃度,評估食品安全。
光譜曲線分析
峰值位置對應特征吸收波長。
峰高與濃度相關。
純度比值解讀
A260/A280 ~ 1.8:高純度 DNA。
A260/A280 ~ 2.0:高純度 RNA。
A260/A230 > 1.8:雜質污染較少。
統計分析
軟件支持重復檢測結果的平均值與標準差計算。
自動生成報告,便于科研數據整理。
檢測值異常高
可能樣品過濃,應稀釋后再測。
檢查是否有氣泡或殘留物影響檢測。
純度比值異常
A260/A280 偏低:蛋白污染。
A260/A230 偏低:鹽類或有機物殘留。
重復性差
加樣體積不足或液滴不完整。
建議重復檢測并取平均值。
檢測平臺污染
使用 70% 乙醇或去離子水清潔光學基座。
保持檢測臂干燥,避免腐蝕。
日常維護
每次檢測后清潔樣品臺。
定期進行光源校準和系統檢查。
實驗優化
對低濃度核酸,使用低吸附槍頭。
對蛋白質樣品,避免使用含強吸收組分的緩沖液。
長期存放
關閉電源,蓋上防塵罩。
放置在干燥穩定的環境中。
賽默飛 NanoDrop Eight 在樣品檢測中以其 微量需求、高通量、自動化與高精度 的優勢,廣泛應用于核酸、蛋白、藥物、環境和食品分析領域。其操作簡便、檢測快速,既滿足科研人員對高效實驗的需求,也保證了檢測結果的準確性與可重復性。
通過掌握 樣品制備、空白校正、光譜分析與結果解讀 的完整流程,研究人員能夠在日常工作中充分發揮 NanoDrop Eight 的優勢,使其成為實驗室中可靠的分析助手。
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