NanoDrop Eight是賽默飛推出的一款高性能多通道微量分光光度計,繼承了NanoDrop系列在核酸、蛋白質等生物樣品微量檢測方面的優勢,并通過八通道并行設計大幅提升了檢測效率。其測試流程設計兼顧高精度和簡便性,使研究人員能夠在分子生物學、蛋白質組學、藥物研發和臨床檢測等多個領域快速獲得可靠數據。
測試流程是保證實驗結果準確性與可重復性的關鍵。本文將系統介紹NanoDrop Eight的標準測試流程,包括樣品準備、儀器開機與校準、檢測步驟、數據分析與結果輸出、維護與常見問題處理等,幫助科研人員全面掌握該設備的使用要點。
傳統分光光度計需要500 μL以上樣品,而NanoDrop Eight僅需1–2 μL即可完成檢測。其核心原理是利用兩根光纖臂之間的液體橋構成光路,光程固定且可自動調整。
NanoDrop Eight能根據樣品濃度自動選擇合適的光程(1 mm、0.2 mm或0.05 mm),保證在寬濃度范圍內保持檢測精度。
樣品對紫外-可見光的吸收由硅光二極管陣列檢測,輸出電信號,再結合朗伯-比爾定律計算濃度。
儀器配置8個檢測通道,可同時檢測8個樣品,極大提升實驗效率,適合高通量研究。
體積:每個檢測點通常需要1–2 μL樣品;
濃度:DNA樣品范圍2–15,000 ng/μL,蛋白質范圍0.1–200 mg/mL;
純度:避免沉淀、雜質或氣泡,以免影響光路。
清潔平臺:用無核酸酶水或70%乙醇擦拭檢測平臺,確保無殘留;
空白對照:準備與樣品相同的緩沖液或溶劑作為基線校正。
啟動NanoDrop Eight軟件;
選擇檢測模式(核酸、蛋白質、熒光標記物、動力學等);
建立實驗項目文件夾,便于數據保存和管理。
打開主機電源;
連接電腦與軟件,確認儀器狀態正常;
進行波長與光程自檢,系統自動完成光學校準。
在每個通道加1–2 μL緩沖液;
關閉光纖臂,點擊“Blank”進行空白測定;
軟件自動保存空白值,作為后續樣品檢測的基線。
在檢測平臺中心滴加樣品;
確保液滴覆蓋光纖接觸點,避免氣泡;
關閉光纖臂,等待光路穩定。
點擊“Measure”開始檢測;
軟件實時顯示吸光度譜圖及濃度結果;
可設置重復測量,提升數據可靠性。
NanoDrop Eight支持自動切換通道;
可一次性加載8個樣品并同時檢測;
軟件可批量生成報告。
DNA濃度通過260 nm吸光度計算;
蛋白質濃度通過280 nm吸光度或特定方法(BCA、Bradford);
軟件自動完成濃度換算。
核酸純度:260/280 比值應在1.8–2.0之間;
蛋白質純度:260/280 比值一般約為0.6;
額外比值(260/230)用于判定有機溶劑或鹽離子污染。
可建立標準品濃度曲線;
自動擬合并輸出R2值,保證定量準確性。
支持Excel、PDF、CSV等格式導出;
可直接上傳至實驗室數據庫;
結果帶有時間戳,方便追溯。
空白對照:使用TE緩沖液;
測定波長:260 nm;
輸出結果:濃度(ng/μL)、純度比值。
空白對照:PBS或樣品緩沖液;
測定波長:280 nm或顯色法特定波長;
輸出結果:濃度(mg/mL)、線性擬合曲線。
一次加載8個樣品;
軟件批量生成檢測報告;
適用于基因測序前建庫檢測或臨床批量樣品分析。
避免交叉污染:每次檢測后用無核酸酶水清潔平臺;
控制樣品體積:過量或不足均會影響結果;
重復檢測:關鍵樣品建議檢測3次,取平均值;
定期校準:使用標準核酸或蛋白溶液進行性能驗證;
記錄實驗條件:溫度、緩沖液成分應如實記錄。
現象:樣品殘留導致后續檢測值偏高;
解決:用無塵紙和乙醇清潔,必要時多次沖洗。
現象:濃度超出范圍或結果不穩定;
解決:檢查光纖臂,確認光程校準是否正常。
現象:譜圖出現異常波動;
解決:重新加樣,避免用力過大造成氣泡。
現象:未能找到實驗數據;
解決:確認保存路徑,建議開啟自動保存功能。
項目 | 傳統分光光度計 | NanoDrop Eight |
---|---|---|
樣品用量 | 500–2000 μL | 1–2 μL |
檢測通道 | 單通道 | 8通道并行 |
光程調節 | 固定1 cm | 自動調節0.05–1 mm |
測試速度 | 每樣品約1–2分鐘 | 每8個樣品約30秒 |
實驗精度 | CV約3–5% | CV約1–2% |
數據管理 | 手動導出 | 自動批量存儲與導出 |
從表中可以看出,NanoDrop Eight不僅提高了測試效率,還在樣品消耗和結果精度方面顯著優于傳統方法。
賽默飛NanoDrop Eight分光光度計以其微量檢測、八通道并行、自動光程調節和高靈敏度探測的優勢,在液體樣品檢測中展現了高效、精準和穩定的性能。通過科學規范的測試流程,科研人員能夠在最小樣品消耗條件下獲得可靠數據,適用于核酸、蛋白質、藥物及臨床樣品等多種應用場景。
規范化的測試流程不僅提高了實驗精度與重復性,還使NanoDrop Eight成為實驗室高通量檢測的重要工具。掌握并優化測試流程,將進一步釋放該儀器的潛能,為分子生物學和生命科學研究提供堅實的數據支持。
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