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賽默飛 NanoDrop Eight 分光光度計是一款多通道微量紫外-可見光檢測儀器，廣泛用于高通量樣本定量，特別是在分子生物學、基因組學、蛋白質組學、臨床研究以及生物技術行業中。與傳統比色皿檢測相比，NanoDrop Eight 采用微量檢測平臺技術，僅需 1–2 μL 樣品 即可完成核酸、蛋白質、寡核苷酸以及其他生物分子的定量和純度分析。
為了確保實驗結果的準確性和可重復性，研究者必須嚴格遵循樣本制備和檢測的相關要求。本文將系統總結 NanoDrop Eight 在使用過程中對樣本的要求，包括樣本體積、濃度、純度以及不同實驗場景下的特定注意事項。
NanoDrop Eight 支持多種生物樣本的光度檢測，主要包括：
核酸樣本
DNA（基因組 DNA、質粒 DNA、PCR 產物等）
RNA（總 RNA、mRNA、tRNA 等）
寡核苷酸（合成引物、探針等）
蛋白質樣本
純化蛋白
細胞裂解液中的粗提蛋白
常見蛋白濃度測定方法包括紫外吸收法（A280）和染料結合法（Bradford、BCA 等）。
其他樣本
細胞或病毒裂解液
多肽溶液
一些特定的小分子化合物（只要在紫外-可見區有吸收峰）。
每個檢測通道只需 1–2 μL 樣品。
過量樣品可能造成浪費，而不足會導致檢測失敗。
NanoDrop Eight 的線性檢測范圍較寬，但不同樣本類型有所區別：
雙鏈 DNA：2–15,000 ng/μL
RNA：2–5,000 ng/μL
寡核苷酸：2–5,000 ng/μL
蛋白質（A280 法）：0.1–100 mg/mL
蛋白質（染料法）：靈敏度更高，可用于低濃度樣本
核酸檢測需通過 A260/A280 比值和 A260/A230 比值來評估純度。
A260/A280 在 1.8–2.0 之間表示核酸較純凈。
A260/A230 在 2.0–2.2 之間表示基本無有機物或鹽類殘留。
蛋白質檢測時，緩沖液中不應含有在 280 nm 處有強吸收的成分。
任何沉淀或懸浮顆粒都會影響結果，應先進行離心或過濾。
常用溶劑包括去離子水、TE 緩沖液、PBS、Tris 緩沖液等。
溶劑必須與實驗體系匹配，并作為“空白”參比。
樣本應無明顯黏稠感，過高濃度的 DNA 溶液需稀釋。
樣品應避免蛋白質、酚或鹽污染，否則 A260/A280 和 A260/A230 比值會異常。
檢測前輕輕混勻，避免部分沉淀。
RNA 樣品需避免降解，操作時應使用 RNase-free 器材。
RNA 質量可通過 A260/A280 比值初步判斷，理想值約為 2.0。
若需進一步確認完整性，應結合凝膠電泳或生物分析儀檢測。
合成的寡核苷酸需溶解均勻，避免局部沉淀。
在核酸定量中，ε（摩爾消光系數）需輸入正確，以保證計算準確。
適用于含有色氨酸、酪氨酸殘基的蛋白。
要求樣品緩沖液在 280 nm 處無強吸收背景。
高鹽或表面活性劑會干擾測定，應避免使用。
常見有 Bradford 法、BCA 法。
適用于低濃度或無芳香族氨基酸殘基的蛋白。
需要繪制標準曲線，確保定量準確。
核酸濃度過低可能導致擴增失敗，應確保 DNA 在 10 ng/μL 以上。
質粒 DNA 檢測應排除 RNA 污染。
RNA 樣品必須高純度，A260/A280 在 2.0 左右。
RNA 應避免反復凍融。
樣本緩沖液中避免含 SDS、Tris 等強吸收物質。
對低濃度樣本，優先選擇染料法。
樣品來源復雜，必須進行預處理以去除雜質。
高鹽或有機溶劑會顯著影響檢測結果，應進行稀釋或純化。
吸光度異常偏高
可能原因：比對液與樣本溶劑不一致。
避免方法：始終使用相同緩沖液作為空白。
結果重復性差
可能原因：樣品未混勻，取樣不均。
避免方法：檢測前充分混勻，避免產生氣泡。
A260/A280 比值偏離
可能原因：蛋白質或酚類污染。
避免方法：重復提取或進一步純化核酸。
無讀數或讀數過低
可能原因：樣本濃度過低或體積不足。
避免方法：提高樣本濃度或檢查移液準確性。
樣本記錄：所有檢測樣本需建立記錄，包括濃度、體積、保存條件。
分批檢測：對于大批量樣品，應統一條件，避免批間差異。
儀器清潔：檢測結束后用去離子水清洗檢測平臺，避免殘留污染。
人員培訓：操作人員必須熟悉 NanoDrop Eight 的基本原理和樣本要求。
賽默飛 NanoDrop Eight 分光光度計以其高通量、低樣本消耗和高精度的特點，已成為現代分子生物學和生物化學實驗室的重要工具。為了獲得可靠的實驗結果，必須嚴格遵循樣本體積、濃度、純度和緩沖液的要求，同時根據不同實驗場景調整樣本制備方法。通過掌握這些樣本要求，研究者不僅可以提升實驗效率，還能顯著提高數據的準確性和重復性。
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