NanoDrop Eight分光光度計是賽默飛在微量檢測領域的重要產品,廣泛應用于生命科學、醫藥研發和生物技術研究。其核心優勢不僅在于微量樣品檢測和多通道并行操作,更在于其強大的數據分析功能。NanoDrop Eight通過快速采集紫外-可見光吸收光譜數據,并結合內置算法進行計算與解讀,為科研人員提供核酸、蛋白質及其他生物樣品的定量與純度分析。本文將全面介紹NanoDrop Eight在數據分析方面的功能與方法。
樣品液滴置于光學柱上,形成液體橋。
光源發出的紫外或可見光穿過樣品,被檢測器接收。
檢測器將透射光強轉換為電信號,并進行A/D轉換。
軟件根據朗伯–比爾定律計算吸光度:
A=?log?10(I/I0)A = -\log_{10}(I/I_0)A=?log10(I/I0)
其中 I0I_0I0 為入射光強,III 為透射光強。
基線校正:空白對照用于扣除背景吸收。
光程調整:自動切換0.5 mm或1.0 mm光程。
數據平滑:減少光譜曲線中的噪聲。
峰值識別:系統自動尋找主吸收峰。
以260 nm處的吸光度作為計算基礎。
DNA換算公式:
C(ng/μL)=A260×50×稀釋倍數C (ng/μL) = A_{260} \times 50 \times 稀釋倍數C(ng/μL)=A260×50×稀釋倍數
RNA換算公式:
C(ng/μL)=A260×40×稀釋倍數C (ng/μL) = A_{260} \times 40 \times 稀釋倍數C(ng/μL)=A260×40×稀釋倍數
A260/A280比值:
≈1.8 表示DNA純凈。
≈2.0 表示RNA純凈。
<1.8 提示蛋白污染。
A260/A230比值:
2.0–2.2為理想值。
<2.0 提示鹽類或有機物污染。
觀察220–350 nm區域,可判斷是否有酚、EDTA等殘留。
光譜曲線平滑表明樣品質量較高。
芳香族氨基酸(色氨酸、酪氨酸)在280 nm有特征吸收。
濃度公式:
C(mg/mL)=A280ε×lC (mg/mL) = \frac{A_{280}}{\varepsilon \times l}C(mg/mL)=ε×lA280
其中ε為消光系數,l為光程長度。
Bradford法:檢測595 nm處吸收峰。
BCA法:檢測562 nm處吸收峰。
Lowry法:檢測750 nm處吸收峰。
系統可根據標準曲線計算未知樣品濃度。
通過全光譜掃描,識別非蛋白成分的吸收峰。
差譜分析可檢測蛋白結合或修飾情況。
8個樣品同步檢測,軟件自動對比。
系統輸出結果表格,便于直接比對不同組別。
各通道光程自動校正,保證數據可比性。
軟件自動標記異常值,減少人為誤差。
對多個樣品的濃度與純度進行批量分析。
可直接導出Excel表格進行后續處理。
全波長掃描曲線可保存為圖像文件。
可疊加不同樣品的光譜進行比對。
輸出樣品編號、A260、A280、A230值、濃度、比值等。
支持CSV、Excel格式導出。
軟件可生成檢測報告,包括實驗日期、樣品信息與分析結果。
支持與實驗室信息管理系統(LIMS)對接。
檢測結果:濃度=120 ng/μL,A260/A280=1.85,A260/A230=2.1。
解讀:DNA濃度適中,蛋白污染少,適合用于PCR擴增。
檢測結果:濃度=95 ng/μL,A260/A280=1.98,A260/A230=1.5。
解讀:RNA較純,但存在鹽類污染,建議進一步純化。
檢測結果:濃度=2.5 mg/mL,光譜曲線平滑。
解讀:樣品適合用于后續的結構研究或功能實驗。
可能原因:樣品濃度過高。
解決方法:適當稀釋樣品。
可能原因:蛋白殘留或緩沖液干擾。
解決方法:重新提取或進行柱純化。
可能原因:樣品中有氣泡或顆粒。
解決方法:離心后取上清液。
可能原因:移液誤差或光程不穩定。
解決方法:重新校準并檢查移液器。
快速:幾秒鐘完成數據采集與計算。
高通量:8個樣品同步檢測,提高效率。
低樣品需求:僅需1–2 μL。
寬動態范圍:無需稀釋即可檢測高濃度樣品。
直觀:輸出濃度、純度比值與光譜曲線。
可追溯性:支持實驗數據歸檔與報告生成。
NanoDrop Eight分光光度計在數據分析方面具有高精度、快速性和多功能的優勢。它不僅能夠提供核酸和蛋白質的濃度與純度數據,還能輸出完整光譜曲線,輔助研究人員判斷樣品質量。多通道并行檢測功能顯著提升了實驗室效率,而數據導出與可視化功能則保證了實驗結果的規范性與可追溯性。通過合理的數據分析流程與科學的解讀,NanoDrop Eight能夠成為生命科學研究中高效可靠的定量分析平臺。
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